Разтваряне на полипептиди
Всяка аминокиселина има присъщи химични свойства и разтворимостта на пептида зависи от неговата последователност и модификации. Препоръчваме да вземете малко количество от пептида за тест за разтворимост, преди да разтворите всички пептиди.
Разтварянето на пептиди е много важна стъпка. Неправилното разтваряне може да доведе до загуба на пептид или неуспех на експеримента. Разтворимостта на пептидите зависи главно от последователността на пептида, така че обърнете внимание, когато проектирате пептида. Препоръчва се пептидната последователност да съдържа 20% заредени остатъци, за да се увеличи нейната разтворимост.
Преди употреба клиентите могат да следват следните три основни принципа, за да изберат подходящ разтворител за разтваряне на пептида.
Първо, избраният разтворител трябва да може напълно да разтвори пептида; Второ, избраният разтворител трябва да е съвместим с експерименталните условия; И накрая, избраният разтворител не трябва да реагира с или да разгражда пептида.
Докато количеството пептид позволява, можете първо да разтворите малка част от пептида и след това да разтворите цялата проба. Ако трябва да възстановите пептида от разтворител, можете да изберете първоначален разтворител, който го прави лесен за отстраняване след лиофилизация.
Следните предложения могат да ви помогнат да разтворите пептидите:
Пептидите с по-малко от 5 аминокиселини обикновено са разтворими във водни разтвори и силно хидрофобните аминокиселини (W, I, L, F, M, V, Y) с изключение на.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% Заредени аминокиселини (E, D, K, R, H) от хидрофилни пептиди и съдържащи<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% Заредените аминокиселини също могат да бъдат неразтворими или частично разтворими във вода. Най-добре е първо да разтворите пептида в минимално количество силен органичен разтворител като DMF, ACN, изопропилов алкохол, етанол, оцетна киселина, 4-8 M GdnHCl, урея или DMSO (не в последователност C, W, M) и други подобни органични разтворители. Най-добре е бавно да добавите органичния разтворител, който разтваря пептида, във водния разтвор капка по капка. Ако разтворът стане мътен, може да е достигнал границата на разтворимост и няма смисъл да продължавате да го разтваряте. Трябва да се отбележи, че първоначално избраният разтворител трябва да е съвместим с експерименталната система.
Hydrophobic amino acid content >75% Силно хидрофобните пептиди обикновено също са неразтворими във водни разтвори. Такива пептиди също трябва първо да се третират със силни органични разтворители (напр. TFA, мравчена киселина), които се разтварят и могат също да се утаят, ако се добавят към воден разтвор. Крайният пептиден разтвор може да изисква високи концентрации на органични разтворители за денатурирането му, а органичните разтворители обикновено не се използват за изследване на биологичната функция в живи клетки.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Полипептидните последователности са склонни да образуват излишни мрежи от междумолекулни водородни връзки и лесно образуват гелове в концентрирани водни разтвори. Такива пептиди могат да бъдат разтворени, както е описано в стъпка 3. За да се намалят възможните проблеми по време на разтваряне, се препоръчва клиентите да обърнат повече внимание на дизайна и последователността, за да се подобри разтворимостта на пептида.